تولید گونه ی تراریخت استرپتومایسس کلاولی جروس واجد ژن cas۲ و بررسی افزایش تولید پادزیست در آن با روش بیواسی

زمینه و اهداف: استرپتومایسس کلاولی جروس تولیدکننده ی پادزیست کلاولانیک اسید است که به طور گسترده ای همراه با سایر پادزیست های قوی و حساس به β لاکتاماز استفاده می گردد. ژن cas2 در دسته ژنی کلاولانیک اسید قرارگرفته و در تنظیم بیوسنتز کلاولانیک اسید نقش دارد. مواد و روش کار: سازه (کانسترکت) نوترکیب pmtcas2 حاوی ژن cas2 از دانشگاه اصفهان تهیه گردید. با استفاده از روش لیز قلیایی پلاسمید نوترکیب از سویه ی استرپتومایسس لیویدنس استخراج گردید. کانسترکت نوترکیب با استفاده از روش پلی اتیلن گلیکول به پروتوپلاست های تهیه شده از باکتری استرپتومایسس کلاولی جروس ترانسفورم گردید. به منظور تأیید ترانسفورماسیون از روش های استخراج پلاسمید و pcr با استفاده از پرایمر های اختصاصی cas2 استفاده شد. درنهایت به منظور بررسی نحوه ی تأثیر ژن cas2 اضافه شده در تولید پادزیست از روش بیواسی استفاده گردید. یافته ها: ساختار پلاسمید نوترکیب پس از استخراج با روش هضم آنزیمی تأیید شد. پس از ترانسفورماسیون کلنی های تک بر روی محیط بازیابی پروتوپلاست حاوی پادزیست اسپورهای خاکستری رنگ بر روی آن شکل گرفت. استخراج پلاسمید از سویه ی ترانسفورم شده انجام شده و ترانسفورماسیون با انجام pcr تأیید گردید. مطالعات بایواسی نشان داد که حضور پلاسمید نوترکیب سبب افزایش 1/4 برابری تولید کلاولانیک اسید در سویه ی استرپتومایسس کلاولی جروس گردیده است. نتیجه گیری: با انجام روش بیواسی و تجزیه وتحلیل یافته ها مشخص شد که حضور پلاسمید نوترکیب واجد ژن cas2 سبب افزایش تولید کلاولانیک اسید در سویه ی استرپتومایسس کلاولی جروس گردیده است. افزایش تولید کلاولانیک اسید می تواند گامی مؤثر در روند کاهش هزینه های تولید داروهای پرمصرف وابسته به آن گردد.